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关于液氮复苏样品的方法及建议

关于液氮复苏样品的方法及建议:

方法一:

准备吸水纸两张,干净毛巾一条。

1.在地面或是桌面上铺两层干净吸水纸。

2.迅速从液氮罐中取出冻存管后,放在吸水纸上(注意一定要将冻存管放到,不要直立起来,因为直立起来的冻存管内液氮很难在短时间内挥发出来,而放平以后,液氮会快速从管缝隙中渗漏出来。

3.用干净毛巾罩住冻存管样品(还是为了防止爆炸造成伤害),大约3-5分钟即可进行后续试验。

方法二:

1.要按照冻存的严格步骤(将冻存管置于4℃30 分钟—>-20℃60 分钟—>-80℃过夜—>液氮罐)一步步来。

2.拧紧盖子后,还用白胶布缠一圈,普通药店有卖的。就是打吊瓶时候粘针头的那种白胶布。这样会好一些,不过仍然会进去点。从液氮罐里取出提篮时应缓慢,然后取出冻存管,室温下放十几秒(注意一定要将冻存管放到,不要直立起来),用带棉手套的手拿着冻存管管盖处,置于37 度水中融化。

3.在整个操作过程中必须穿戴保护服,包括手套,脸罩等。

方法三:

使用Nunc 冻存管,机械密封的冻存管必须密封在保护袋中。Nunc 提供CryoFlex 密封管,热密封的聚乙烯管专门为Nunc 冻存管密封设计。将冻存管在液氮液相中冻存而没有使用CryoFlex 密封管是十分危险的,冻存管在液氮液相中冻存必须使用CryoFlex 密封管进行热密封。

警告:不要使用Nunc 的冻存管在液氮液相,除非正确的将冻存管密封在NuncCryoFlex Tubing (Cat. No. 343958)中。若不正确使用冻存管,液氮会进入冻存管中导致压力上升,发生爆炸或者生物泄漏安全事故。正确使用方法可以参考NalgeNunc International Cryopreservation Manual。

当冻存管储存在液氮液相中而没有使用CryoFlex Tubing 时,复苏时应将冻存管从液氮液相取出后必须在液氮气相中储存24h,这样可以使得液氮从冻存管中慢慢的蒸发和逃逸,从而降低冻存管中的压力。等在液氮气相储存24h 后,将冻存管放入水浴槽,同时用毛巾覆盖,等熔融复苏结束后转移冻存物。此方法也可在方法一及方法二中作为前处理使用。

整个操作过程中必须穿戴保护服,包括手套,脸罩等。

纯属众盼鑫液氮罐技术人员个人经验,希望对大家有所帮助。


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